以下文章來(lái)自：上海瑋馳公眾號(hào)

自從Emily Whitehead帶來(lái)癌癥治愈新希望后，CAR-T細(xì)胞療法再次穩(wěn)固了它免疫細(xì)胞療法領(lǐng)域的中心地位。繼諾華的CTL019之后，F(xiàn)DA在2017年公布Kite公司的Yescarta CAR-T免疫細(xì)胞療法成為FDA認(rèn)證的第二個(gè)細(xì)胞治療藥物，目前FDA已經(jīng)批準(zhǔn)的CAR-T產(chǎn)品有6款。隨著全球范圍內(nèi)生物細(xì)胞技術(shù)和產(chǎn)業(yè)快速發(fā)展，細(xì)胞治療及臨床轉(zhuǎn)化成為我國(guó)健康保障發(fā)展的重大課題，國(guó)內(nèi)企業(yè)也在迅猛發(fā)展，除復(fù)興凱特和藥明巨諾以外，多家本土細(xì)胞治療公司的產(chǎn)品有望在未來(lái)1-2年內(nèi)上市。

盡管近兩年細(xì)胞治療產(chǎn)品的細(xì)胞來(lái)源和種類不斷豐富，針對(duì)T細(xì)胞進(jìn)行改造的細(xì)胞療法目前仍占據(jù)整個(gè)細(xì)胞治療行業(yè)的重要部分。而CAR-T細(xì)胞產(chǎn)品的制備流程十分復(fù)雜，涉及到單采采集，T細(xì)胞細(xì)胞分選激活，基因修飾，擴(kuò)增培養(yǎng)，收獲凍存等多個(gè)步驟。其中T細(xì)胞的分選和激活是非常關(guān)鍵的一個(gè)工藝環(huán)節(jié)，關(guān)系著后續(xù)是否成功制備細(xì)胞產(chǎn)品。

CAR-T細(xì)胞療法生產(chǎn)工藝流程概覽

（圖片來(lái)源：諾華官網(wǎng)）

越來(lái)越多的文獻(xiàn)表明，T細(xì)胞分選在CAR-T細(xì)胞制備中非常重要，直接影響到CAR-T細(xì)胞的抗腫瘤活性。Juno的早期創(chuàng)始人Stanley R. Riddell曾發(fā)表報(bào)道：CD19 CAR–T cells of defined CD4+:CD8+ composition in adult B cell ALL patients（ClinicalTrials.gov #NCT01865617）。文章主要介紹了限定比例的CD19-CAR T細(xì)胞在29例難治/復(fù)發(fā)急性B淋巴細(xì)胞白血病患者中的臨床治療效果，其中27例（93%）患者實(shí)現(xiàn)了骨髓水平的緩解。他指出：“與來(lái)自未分選的T細(xì)胞相比，有特定亞群的T細(xì)胞產(chǎn)生的CAR-T細(xì)胞產(chǎn)品具有更好的抗腫瘤效應(yīng)。“在2017年CDE發(fā)布的《嵌合抗原受體修飾T細(xì)胞（CAR-T）制劑制備質(zhì)量管理規(guī)范》中也明確建議：”對(duì)采集的外周血進(jìn)行單個(gè)核細(xì)胞的分離及T細(xì)胞的分化，并對(duì)所分選出的T細(xì)胞進(jìn)行刺激和活化。”進(jìn)行T細(xì)胞分選可以帶來(lái)如下好處：

目前針對(duì)T細(xì)胞的分選及激活主要有2種策略。一是以納米級(jí)別磁珠為基礎(chǔ)的分選，主要策略包括有CD4/CD8的分選或CD3的分選，聯(lián)合后續(xù)納米級(jí)別的CD3/CD28抗體激活試劑；二是以微米級(jí)別磁珠直接偶聯(lián)CD3/CD28抗體對(duì)T細(xì)胞進(jìn)行分選及激活。

市場(chǎng)上納米級(jí)別磁珠的大小在50-500nm之間，分為有柱式分選和無(wú)柱式分選。無(wú)柱式分選操作簡(jiǎn)單快捷，無(wú)需負(fù)擔(dān)分選柱的耗材成本。無(wú)柱式分選的納米級(jí)別磁珠大小在200-500nm，由于納米級(jí)別磁珠的磁力作用相對(duì)較弱，需要添加大量的磁珠抗體與細(xì)胞表面抗原結(jié)合，細(xì)胞才能被磁鐵吸附從而被分選出來(lái)。而過(guò)量的磁珠抗體標(biāo)記可能對(duì)細(xì)胞的信號(hào)通路產(chǎn)生激活從而影響細(xì)胞功能，因此無(wú)柱式分選往往應(yīng)用于陰性分選，即磁珠標(biāo)記非目的細(xì)胞，通過(guò)磁分的方式將非目的細(xì)胞去除。另一方面，無(wú)柱式分選操作中存在開放操作步驟，如需應(yīng)用到GMP生產(chǎn)，需要在A級(jí)環(huán)境進(jìn)行操作。而有柱式分選，可通過(guò)分選柱結(jié)構(gòu)有效增大磁場(chǎng)強(qiáng)度梯度，磁珠大小在50-100nm之間，少量的磁珠標(biāo)記，細(xì)胞就可被分選出來(lái)，且無(wú)需對(duì)磁珠進(jìn)行去除。借助于分選柱的密閉結(jié)構(gòu)，可將整個(gè)磁珠分選的步驟在全密閉的自動(dòng)化系統(tǒng)中完成，這也是目前CGT行業(yè)進(jìn)行細(xì)胞分選的金標(biāo)準(zhǔn)之一。

T細(xì)胞的另一種激活分選策略則采用微米級(jí)別磁珠直接偶聯(lián)CD3/CD28抗體。以Dynabeads™為代表的4.5μm級(jí)別的激活磁珠也是目前T細(xì)胞激活的另一主流產(chǎn)品。微米級(jí)別磁珠具有更強(qiáng)的結(jié)合能力，更強(qiáng)的激活效果，可將T細(xì)胞的分選及激活步驟整合。且微米級(jí)別磁珠無(wú)需分選柱結(jié)構(gòu)即可完成分選，節(jié)省了分選柱的耗材成本。但監(jiān)管法規(guī)要求對(duì)微米級(jí)別磁珠在最終產(chǎn)品的殘留進(jìn)行檢測(cè)，并達(dá)到相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)，因此需要對(duì)激活擴(kuò)增后的細(xì)胞進(jìn)行磁珠去除的操作。

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